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    elisa試劑盒中常用的防腐劑有哪些呢?

    發(fā)布時(shí)間: 2021-11-24  點(diǎn)擊次數(shù): 1909次
     
      elisa試劑盒是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的elisa試劑盒,其試劑安穩(wěn)、易保留、操作簡(jiǎn)練、作用區(qū)分客觀等要素,適宜于大規(guī)模篩查實(shí)驗(yàn)又能夠用于少數(shù)標(biāo)本的檢查,能夠做定性實(shí)驗(yàn)也能夠做定量分析。
      試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
      elisa試劑盒中常用的防腐劑有:
      1、疊氮鈉是HRP的抑制劑,凡是和HRP接觸的試劑,一定不能用;
      2、硫柳汞在ELISA試劑中可普遍使用,但因其有毒,較少使用;
      3、市面許多試劑盒產(chǎn)品,用抗生素做防腐劑較多,如慶大。
      4、如果試劑僅在實(shí)驗(yàn)室短期使用,其實(shí)并不需加防腐劑,常規(guī)試劑放4度冰箱,抗體、酶等加甘油分裝凍存即可。
      5、防污染可添加0.02%的疊氮鈉,或0.01%的硫柳汞。疊氮鈉在多數(shù)情況下有用且有效,但在有些實(shí)驗(yàn)中卻不合適,因?yàn)樗茏钄嗉?xì)胞的電子傳遞鏈,對(duì)許多生物體都有毒性,因此不能用于活體實(shí)驗(yàn);因?yàn)楹邪被芨蓴_許多標(biāo)記方法;不能用于辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體。而硫柳汞不含氨基,不影響基質(zhì)的穩(wěn)定性。如果將抗體應(yīng)用于生物活性檢測(cè)、體內(nèi)實(shí)驗(yàn),一般不使用任何防腐劑,這些實(shí)驗(yàn)用的抗體應(yīng)少量分裝冷存,切忌反復(fù)凍融。
      6、吐溫-20是作為穩(wěn)定劑,可減少非特異性黏合。
      7、甘油是防止凍融過(guò)程中的固-液相變而引起蛋白變性,能有效地增強(qiáng)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,-20度凍存時(shí)甘油的濃度可以在20~30%。
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